Interleukin-2 Receptor Subunit Alpha Mouse IL2R CD25 IL2-RA ELISA Kit

وحدة مستقبلات الفأر Interleukin-2 alpha ؛IL2R ؛CD25 ؛ مجموعة IL2-RA ELISA

المواد المتوفرة مع المجموعة

متطلبات العينة

• مصل-التخثر في درجة حرارة الغرفة 10-20 دقيقة ، الطرد المركزي 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة إزالة طاف ، إذا ظهر هطول الأمطار ، الطرد المركزي مرة أخرى.
• بلازما-استخدم EDTA أو بلازما السترات المناسبة كمضاد للتخثر ، امزج 10-20 دقيقة ، الطرد المركزي 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة ، قم بإزالة المادة الطافية ، إذا ظهر الترسيب ، الطرد المركزي مرة أخرى.
• البول- قم بجمع حاوية معقمة ، طرد مركزي لمدة 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة ، قم بإزالة المادة الطافية ، إذا ظهر الترسيب ، الطرد المركزي مرة أخرى.العملية من Hydrothorax والسائل النخاعي الإشارة إليها.
• طاف ثقافة الخلية- كشف المكونات الإفرازية ، وجمع حاوية معقمة ، والطرد المركزي 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة ، وإزالة المادة الطافية ، واكتشاف تكوين الخلايا ، وتخفيف تعليق الخلية مع PBS (PH7.2-7.4) ، وصل تركيز الخلية إلى 1 مليون / مل ، دورات ذوبان التجميد المتكررة ، إتلاف الخلايا وإطلاق المكونات داخل الخلايا ، الطرد المركزي 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة إزالة المادة الطافية ، إذا ظهر الترسيب ، الطرد المركزي مرة أخرى.
• عينات الأنسجة- بعد قطع العينات ، تحقق من الوزن ، أضف PBS (PH7.2-7.4) ، مجمدة بسرعة بالنيتروجين السائل ، احتفظ بالعينات عند 2-8 ℃ بعد الذوبان ، أضف PBS (PH7.4) ، متجانس باليد أو المطاحن ، الطرد المركزي 20 دقيقة بسرعة 2000-3000 دورة في الدقيقة إزالة طاف.
• الاستخراج في أقرب وقت ممكن بعد جمع العينة ، ووفقًا للأدبيات ذات الصلة ، ويجب إجراء التجربة في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج.إذا لم تستطع ، يمكن الاحتفاظ بالعينة في -20 درجة مئوية للحفاظ عليها ، وتجنب دورات التجميد والذوبان المتكررة.
• لا يمكن اكتشاف العينة التي تحتوي على NaN3 ، لأن NaN3 يثبط نشاط HRP.

مبدأ

تستخدم مجموعة ELISA هذه Sandwich-ELISA كطريقة.تم طلاء صفيحة Microelisa المتوفرة في هذه المجموعة مسبقًا بجسم مضاد خاص بـIL2R.يتم إضافة المعايير أو العينات إلى آبار Microelisa المجردة المناسبة ويتم دمجها مع الجسم المضاد المحدد.ثم بيروكسيداز الفجل (HRP) - جسم مضاد مترافق خاص بـIL2Rيضاف إلى كل بئر ميكروليزا وحضنت.يتم غسل المكونات المجانية.يضاف محلول الركيزة TMB إلى كل بئر.فقط تلك الآبار التي تحتوي علىIL2Rوسيظهر الجسم المضاد للثرومبومودولين المترافق مع HRP باللون الأزرق ثم يتحول إلى اللون الأصفر بعد إضافة محلول التوقف.تُقاس الكثافة الضوئية (OD) بالطيف الضوئي بطول موجة 450 نانومتر.تتناسب قيمة OD مع تركيزIL2R.يمكنك حساب تركيزIL2Rفي العينات بمقارنة OD للعينات بالمنحنى القياسي.

ملحوظات:

• قم بتخزين المجموعة في 4 درجات مئوية عند الاستلام. يجب موازنة المجموعة إلى درجة حرارة الغرفة قبل الفحص.قم بإزالة أي شرائط غير ضرورية من لوحة IL2R المطلية بالأجسام المضادة ، وأعد إحكام إغلاقها في رقائق قفل مضغوط واحفظها عند 4 درجات مئوية.
• قد تظهر الرواسب في محلول غسيل مركّز.يرجى تسخين المخزن المؤقت لإذابة جميع الرواسب ، والتي لن تؤثر على النتائج.
• يجب استخدام ماصة دقيقة لتجنب الخطأ التجريبي.يجب إضافة العينات إلى Microplate في أقل من 5 دقائق.إذا تم تضمين عدد كبير من العينات ، يوصى باستخدام ماصة متعددة القنوات.
• يجب تضمين منحنى قياسي في كل مقايسة.يوصى بتكرار الآبار.إذا كانت قيمة OD للعينة أكبر من البئر الأول للمعايير ، فيرجى تخفيف العينة (عدد مرات) قبل الاختبار.عند حساب تركيز الثرومبومودولين الأصلي ، يرجى ضرب عامل التخفيف الكلي (XnX5).
• من أجل تجنب التلوث المتبادل ، فإن مانعات التسرب بالصفائح الدقيقة تستخدم لمرة واحدة فقط.
• الرجاء إبقاء الركيزة بعيدا عن الضوء.
• يجب أن تتم جميع العمليات وفقًا لتعليمات الشركة الصانعة بدقة.النتائج التي يحددها قارئ لوحة Microtiter.
• يجب معالجة جميع العينات ومحلول الغسيل والنفايات كعوامل معدية.
• لا ينبغي خلط الكواشف من دفعات مختلفة.