مجموعة أدوات اختبار Human Anti HIV 1 & 2 Elisa لفيروس نقص المناعة البشرية

3. إجراء الفحص

• اسمح لجميع المكونات بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.عازلة غسيل مركزة مخففة 1:20 مع ddH2O.
• ضع عنصري تحكم موجبين وثلاثة سلبيين.الاستغناء عن 100 ميكرولتر من التحكم الإيجابي (HIV-1 و HIV-2) بالإضافة إلى التحكم السلبي في نسختين في الآبار المعنية بدون مخفف العينة.اضبط مساحة فارغة بالإضافة إلى التحكم في الخلفية دون إضافة أي سائل.أضف 50 مايكرولتر من المادة المخففة في كل اختبار جيدًا ، أضف 50 ميكرولتر من مصل الاختبار أو البلازما إلى آبار الاختبار وامزج جيدًا.
• ضع لوحة ميكروتيتر في صندوق مرطب واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
• تجاهل محلول التفاعل وإضافة 350 مايكرولتر من محلول الغسيل المخفف إلى كل بئر.تخلص من المخزن المؤقت للغسيل بعد النقع لمدة 15-30 ثانية.كرر عملية الغسيل 5 مرات ثم اقلب اللوحة بقوة لإخراج كل المياه وسد حافة الآبار على ورق ماص لبضع ثوان.
• أضف 100 مايكرولتر من الإنزيم المتقارن إلى كل بئر.مزجها بلطف عن طريق تحريك لوحة ميكروتيتر على مقعد مسطح لمدة 1 دقيقة.لا تضف الانزيم المتقارن الى الفراغ البئر ..
• ضع لوحة ميكروتيتر في صندوق مرطب واحتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
• اغسل كل بئر 5 مرات عن طريق ملء كل بئر بمخزن غسيل 1X المخفف ، ثم اقلب اللوحة بقوة لإخراج كل الماء وسد حافة الآبار على ورق ماص لبضع ثوان.
• أضف 50 مايكرولتر من محلول الركيزة A (ركيزة HRP) لكل بئر ، ثم أضف 50 مايكرولتر من محلول الركيزة B (TMB) لكل بئر.تخلط بلطف وتحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
• أضف قطرة واحدة (50 مايكرولتر) من محلول الإيقاف لكل بئر لإيقاف تفاعل اللون.
• اقرأ قيمة OD عند 450 نانومتر / 630 نانومتر مع قارئ لوحة الفلتر المزدوج.إنه خيار لقراءة قيمة OD عند 450 نانومتر مع قارئ لوحة المرشح الفردي.(باستخدام قيمة OD للبئر الفارغ لتصحيح كل قراءة OD من جميع الآبار