مجموعة إليسا

الغرض من اختبار RUO HBcAb ELISA هو الكشف النوعي عن الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد B في المصل البشري / البلازما

كجزء من عائلة Hepadnaviridae ، يعد فيروس HBV فيروسًا محاطًا بحمض نووي مزدوج الخيوط وهو السبب الرئيسي لانتقال التهاب الكبد عن طريق الدم.تتراوح آثار عدوى فيروس التهاب الكبد من خفيفة إلى شديدة، والتي تشمل مشاكل الكبد المزمنة، مثل سرطان الكبد و تليف الكبد.يجب تحديد المؤشرات المضادة للسرولوجيا خلال المراحل الثلاث للعدوى - الحضانةالمكون الرئيسي للفيروس هو مضاد الالتهاب الكبد B الأساسي (HBcAg).يتكون هذا المضاد الأساسي من بولي ببتيد واحد يبلغ طوله حوالي 17kD يتم تفريغه عند تفكيك جزيئات الأساس. يوجد في المضاد ما لا يقل عن عامل تحديد مناعي واحد. بعد فترة وجيزة من ظهور HBsAg ، تظهر الأجسام المضادة لـ HBcAg (الجسم المضاد الكلي لمضاد HBc و IgM) ولا تختفي أبدًا. في الحالات المعزولة,يمكن الإصابة بالتهاب الكبد B بدون مضاد HBc قابل للكشف من الناحية المناعية.يقدم فحص مضادات HBc بيانات عن انتشار التهاب الكبد B في مختلف السكانهذا لأن مضاد HBc هو علامة على عدوى HBV الحادة أو المزمنة أو التي تم حلها. إن تحديد مضاد HBc أمر حيوي عند تشخيصه في بيئة سريرية.مع اختبارات التهاب الكبد B الأخرى، يسمح مؤشر مضاد HBc بتشخيص صحيح ومراقبة مناسبة لتطور الفيروس.قد يكون مضاد HBc هو المؤشر الوحيد للعدوى بالتهاب الكبد B (بما في ذلك الاختبارات الأخرى للمرضى السلبيين لـ HBsAg).

المواد والمكونات

ميكروبلات:شرائط الحفرة الدقيقة الفارغة مثبتة على حامل الشريط الأبيض. يتم إغلاق اللوحة في كيس ألومنيوم بمجفف. يحتوي كل بئر على HBcAg مطهرة. يمكن كسر شرائط الحفرة الدقيقة لاستخدامها بشكل منفصل.ضع الآبار أو الشرائط غير المستخدمة في كيس التخزين البلاستيكي القابل للإغلاق المزود مع المجفف وإرجاعها إلى 2-8 درجة مئويةبعد فتحها، مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجات مئوية.

التحكم السلبي:(1x1. 0 مل لكل قنينة)00. 1٪ ProClin TM 300 سائل أصفر ملئ في قنينة مع غطاء مسدس أخضر. تم اختبار العازل المستقر بالبروتين غير فعال لـ HBcAb. جاهز للاستخدام كما هو موصول. بمجرد فتح ، مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجة مئوية.

التحكم الإيجابي:(1x1. 0 مل لكل قنينة)00. 1٪ ProClinTM 300 سائل أحمر ملئ في قنينة مع غطاء مقفل أحمر. HBcAb مخفف في بوفر مستقر بالبروتين. جاهز للاستخدام كما هو متوفر. بعد فتح، مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجة مئوية.

(كونجوجات)(1×6 مل لكل قنينة)00. 1٪ ProClinTM 300 سائل أحمر اللون في قنينة بيضاء مع غطاء مقبض أحمر.مستقرة لمدة شهر واحد عند 2-8 درجة مئوية.

غسيل العازل:(1x20ml لكل زجاجة) تدمير قبل الاستخدام!4، 20 × PBS يجب تخفيف التركيزمن 1 إلى 19بالماء المقطر / المزيل قبل الاستخدام. بعد تخفيفه، مستقر لمدة أسبوع واحد في درجة حرارة الغرفة، أو لمدة أسبوعين عند تخزينها عند 2-8 درجة مئوية.

القاعدة (أ):(1x6ml لكل قنينة) سائل بلا لون مليء في قنينة بيضاء مع غطاء مسدس أخضر محلول بيروكسيد اليوريا جاهز للاستخدام كما هو متوفر بعد فتح مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجات مئوية

البناء الأساسي ب:(1×6 مل لكل قنينة) سائل بلا لون مليء في قنينة سوداء مع غطاء مسدس أسود.TMB (تيتراميثيل بنزيدين) محلول جاهز للاستخدام كما هو متوفر. بعد فتح، مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجة مئوية.

توقف الحل:(1x6ml لكل قنينة) سائل بلا لون في قنينة بيضاء مع غطاء ملفوف أبيض محلول حمض الكبريتيك المخفف (0. 5M H₂إذاً₄) جاهز للاستخدام كما هو متوفر. بعد فتح، مستقر لمدة شهر واحد عند 2- 8 درجة مئوية.

حقيبة بلاستيكية قابلة للتخمين:لاحتواء الشرائط غير المستخدمة

إدراج العبوة1 نسخة

غطاء لوحات الكرتون2 ورق

لتغطية الصفائح أثناء الحضانة ومنع التبخر أو تلوث الآبار.

الإجراء

مادة التحضير:دع المفاعلات تصل إلى درجة حرارة الغرفة (18-30 درجة مئوية) ، وقم بتخفيف عازل الغسل (20X) كما هو موضح في تعليمات الغسل.استخدم الماء المقطر أو غير المؤين والحاويات النظيفة فقط لتخفيف العازلجميع المفاعلات الأخرىجاهزة للاستخدام كما تم توفيرها.

1. الاستعداد:صياغة آبار الصفائح الدقيقة لمراقبة العينة والمرضى ليتم تحليلها. قم بإعادة أي شرائط حفرة صغيرة غير مستخدمة إلى أغلاق الحقيبة الألومنيوم وتخزينها عند 2-8 درجة مئوية.
2. إضافة عينة:إضافة 50μl من العينة أو العينة إلى البئر المخصص.
3. إضافة الجمع:إضافة 50μl منالجمعفي كل بئر ما عدا البلانك
4. الحضانة:غطي الصفيحة بغطاء الصفيحة واستحم لمدة 30 دقائقعند 37 درجة مئوية
5. غسيل:في نهاية الحضانة ، قم بإزالة وغلق غطاء الطبق. اغسل كل بئر 5 مرات مع غسيل المخفف المخفف. في كل مرة اسمح للثقوب الدقيقة أن تنقع لمدة 30-60 ثانية.بعد دورة الغسيل الأخيرة، انزلي الصفيحة على ورقة التنظيف أو منشفة نظيفة و اضغطي عليها لإزالة أي بقايا.
6. إضافة الركيزة:إضافة 50μl من محلول الركيزة A و 50μl من محلول الركيزة B في كل بئر.10 دقائقعند 37 درجة مئوية وتجنب الضوء
7. إضافة حل التوقف:باستخدام أنبوب متعدد القنوات أو يدويا، إضافة50μأنامن Stop Solution في كل بئر وخلط بلطف.
8. قياس الامتصاص:معايرة قارئ اللوحة مع الفارغ جيدا وقراءة امتصاص في450nmإذا تم استخدام جهاز تصفية مزدوج، حدد طول الموجة المرجعي عند630nmحساب قيمة الحد وتقييم النتائج.ملاحظة:قراءة امتصاص داخل10 دقائقبعد توقف التفاعل).