مجموعة الـ RUO HBsAg Elisa

اختبار الإمتصاص المناعي المرتبط بالأنزيم للكشف عن HBsAgفي المصل أو البلازما

الـ HBsAg EIA هو اختبار المناعة الساندويتش في مرحلة صلبة متزامنة ، والذي يستخدم الأجسام المضادة الأحادية النسخة والأجسام المضادة متعددة النسخ المحددة لـ HBsAg.الميكروتيتير بشكل جيد مغطاة بأجسام مضادة أحادية النسخ محددة لـ HBsAgيتم إضافة عينة من المصل إلى آبار ميكروتيتر المغطاة بالجسم المضاد مع الأجسام المضادة البوليكلونية المرتبطة بالأنزيم. إذا كان HBsAg موجودًا ، فسوف يشكل معقد أجسام مضادة-HBsAg-جسم مضاد-أنزيم.ثم يتم غسل الصفيحة لإزالة المادة غير المرتبطةوأخيراً، يتم إضافة محلول من الركيزة إلى الآبار وتحفيزها. سوف يتطور لون أزرق متناسب مع كمية HBsAg الموجودة في العينة. The enzyme-substrate reaction can be stopped and the result is visualized by naked eye or read by EIA plate reader for absorbance at the wavelength of 450 nm(450 nm/630 nm) and is proportional to the amount of antibodies present in the specimen..

المواد المقدمة مع مجموعات:

إجراءات الاختبار:

يُنصح بشدة بتحليل كل عينة وعينة تحكم في نسختين. يجب أن يتوازن جميع المفاعلات إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام.

1. إعطاء قطرة واحدة (50μl) من التحكم الإيجابي وكذلك التحكم السلبي في نسخ مزدوجة في الآبار ذات الصلة.و 50 جزء من عينات المصل أو البلازما في آبار الاختبار.
2. إضافة قطرة واحدة (50μl) من Enzyme Conjugate إلى كل بركة. خلطها بلطف عن طريق تدوير لوحة microtiter على مقعد مسطح لمدة دقيقة واحدة.لا تضيف Enzyme Conjugate إلى البئر الفارغ.
3. ضع صفائح الميكروتيتير في صندوق رطب، واستعرض في درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
4. اغسل كل بئر 5 مرات عن طريق ملء كل بئر بمكافئ غسيل مخفف ، ثم عكس اللوحة بقوة لإخراج كل المياه وقفل حافة الآبار على الورق الممتص لعدة ثوان.
5. إضافة قطرة واحدة (50μl) من محلول الركيزة A (HRP-substrate) إلى كل بئر، ثم إضافة قطرة واحدة (50μl) من محلول الركيزة B (TMB) إلى كل بئر. خلط بلطف وحظيرة في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
6. إضافة قطرة واحدة (50μl) من محلول التوقف إلى كل بئر لوقف رد الفعل اللون. قراءة قيمة OD عند 450 نانومتر / 630 نانومتر مع قارئ لوحة المرشح مزدوجة.هناك خيار لقراءة قيمة OD عند 450 نانومتر مع قارئ لوحة المرشح الواحد. (باستخدام قيمة OD من البئر الفارغ لتصحيح كل قراءة OD من جميع الآبار)