مجموعة اختبار إيريسين البشري ELISA

الاستخدام المقصود

هذه المجموعة تسمح بتحديد تركيزات إيريسين في مصل البشر، البلازما والسوائل البيولوجية الأخرى

إجراءات التقييم

1.تخفيف وإضافة العينة:تخفيف الكثافة الأصلية القياسية على النحو التالي:

2إضافة عينة: وضع البئر الفارغة بشكل منفصل (بئر المقارنة الفارغة لا يضيف عينة ومفاعل HRP-Conjugate، غير كل عملية خطوة هي نفسها).إضافة 50μl من القياسية إلى Microelisa stripplateإضافة 40μl من مخفف العينة إلى بئر عينة الاختبار، ثم إضافة عينة الاختبار 10μl (التخفيف النهائي للعينة هو 5 أضعاف) ، إضافة عينة إلى الآبار ، لا تلمس جدار البئر بقدر الإمكان، ومزج بعناية.

3.الاحتضان: بعد إغلاق الصفيحة مع غشاء الصفيحة الإغلاقية ، الحضانة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

4.تهيئة سائل: محلول غسل 30 ((أو 20)) مرة مخفف 30 مرة (أو 20 مرة) بالماء المقطر والاحتياطي.

5غسل:كشف غشاء لوحة الإغلاق، التخلص من السائل، الجفاف عن طريق التأرجح، إضافة عازل غسيل إلى كل بئر، لا تزال لمدة 30 ثم تصريف، كرر 5 مرات، جفاف عن طريق ضرب.

6إضافة إنزيم:إضافة 50μl من المفاعل المرتبط بـ HRP إلى كل بئر، باستثناء البئر الفارغ.

7.حضانة: عملية مع 3.

8غسل: تشغيل مع 5.

9.الوان:إضافة محلول الكروموجين A 50ul و محلول الكروموجين B 50ul إلى كل بئر، وتجنب الحفاظ على الضوء لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية

10توقف التفاعل: أضف محلول توقف50μl إلى كل بئر، توقف التفاعل ((تغير اللون الأزرق إلى اللون الأصفر).

11.القياس:خذ بركة فارغة عند الصفر ، وقراءة امتصاص عند 450 نانومتر بعد إضافة محلول التوقف وخلال 15 دقيقة.

متطلبات العينات

1يجب استخراج العينات في أقرب وقت ممكن بعد جمع العينات وفقًا للأدبيات ذات الصلة ، ويجب إجراء التجربة في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج.يمكن الاحتفاظ بالعينات في -20 درجة مئوية للحفاظتجنب دورات التجمد والتذوب المتكررة.

2لا يمكن الكشف عن العينة التي تحتوي على NaN3 لأن NaN3 يمنع HRP نشط.

3يجب استخراج العينات في أقرب وقت ممكن بعد جمع العينات وفقًا للأدبيات ذات الصلة ، ويجب إجراء التجربة في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج.يمكن الاحتفاظ بالعينات في -20 درجة مئوية للحفاظتجنب دورات التجمد والتذوب المتكررة.

4لا يمكن اكتشاف العينة التي تحتوي على NaN3 لأن NaN3 يمنع HRP نشط.

ملاحظات مهمة

• يجب أن تخرج المجموعة من البيئة المبردة وتتوازن لمدة 15-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، لوحات ELISA مغلفة إذا لم تستخدم بعد فتحها،يجب تخزين اللوحة في كيس مغلق.
• غسل العازل سيؤدي إلى تفريق التبلور ، ويمكن تسخين الماء يساعد في الذوبان عند التخفيف. غسل لا يؤثر على النتيجة.
• إضافة عينة مع عينة كل خطوة، وقراءة الدقة لها في كثير من الأحيان، وتجنب الخطأ التجريبي. إضافة عينة في غضون 5 دقائق، إذا كان عدد العينة هو الكثير ، نوصي باستخدام Volley.
• إذا كان محتوى مادة الاختبار أعلى من اللازم (معينة OD أكبر من أول بئر قياسي ) ، يرجى تخفيف العينة (n-fold) ، يرجى تخفيفها وتضاعف على عامل التخفيف.(×n×5).
• غشاء لوحة الإغلاق يحد فقط من الاستخدام المستخدم لمرة واحدة، لتجنب التلوث المتبادل.
• الركيزة تهرب من الحفاظ على الضوء.
• يرجى وفقا لتعليمات الاستخدام بدقة، يجب أن تأخذ تحديد نتائج الاختبار قارئ لوحة microtiter كمعيار.
• يجب أن تكون جميع العينات، ومواد الغسيل وكل نوع من النفايات وفقا لعملية المواد المعدية.
• لا تخلط المفاعلات مع تلك من مجموعات أخرى.