مجموعة اختبار TNF-α Elisa البشرية

الاستخدام المقصود

هذه المجموعة تستخدم لتحديد تركيزات TNF-α في ثقافة الخلية البشرية.

إجراءات التقييم

1خفيف وإضافة العينة:خفيف الكثافة الأصلية القياسية كما في الجدول السفلي: 400ng/L 5 Standard 150μl Original density Standard+150μl Standard diluent 200ng/L 4 Standard 150μl 5 Standard+150μl Standard diluent 100ng/L 3 Standard 150μl 4 Standard+150μl Standard diluent 50ng/L 2 Standard 150μl 3 Standard +150μl Standard diluent 25ng/L 1 Standard 150μl 2 Standard +150μl Standard diluent

2إضافة عينة: قم بتعيين عينات فارغة بشكل منفصل (لا تضيف عينات مقارنة فارغة ومستجيب HRP-Conjugate ، غير أن كل عملية خطوة هي نفسها).إضافة 50μl من القياسية إلى Microelisa stripplateإضافة 40μl من خفيفة العينة إلى عينة الاختبار ثم إضافة عينة الاختبار 10μl (التخفيف النهائي للعينة هو 5 أضعاف) ، إضافة العينة إلى العينة ، لا تلمس الحائط بقدر الإمكان ، ومزج بعناية.

3.الاحتضان: بعد إغلاق الصفيحة مع غشاء الصفيحة الإغلاقية ، الحضانة لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية.

4- تشكيل السائل: محلول غسل 30 ((أو 20)) مرة مخفف 30 مرة (أو 20 مرة) بالماء المقطر والاحتياطي.

5غسل:كشف غشاء الصفيحة المغلقة، والتخلص من السائل، وتجفيف عن طريق التأرجح، إضافة عازل الغسيل إلى كل حفرة، استمر لمدة 30 ثانية ثم تصريف، كرر 5 مرات، جفاف عن طريق ضرب.

6إضافة إنزيم: إضافة 50μl من المفاعل المرتبط بـ HRP إلى كل حبة، باستثناء الحبة البيضاء.

7.حضانة: عملية مع 3.

8غسل: تشغيل مع 5.

9.الوان:إضافة محلول الكروموجين A 50ul و محلول الكروموجين B 50ul إلى كل حبل، وتجنب الحفاظ على الضوء لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية

10توقف التفاعل: أضف محلول توقف50μl إلى كل حبة، توقف التفاعل ((تغير اللون الأزرق إلى اللون الأصفر).

11اختبار:خذ شفرة خالية عند الصفر، وقراءة امتصاص عند 450 نانومتر بعد إضافة محلول التوقف وخلال 15 دقيقة.

متطلبات العينات

1يجب استخراج العينات في أقرب وقت ممكن بعد جمع العينات ووفقاً للأدبيات ذات الصلة، ويجب أن يتم التجربة في أقرب وقت ممكن بعد استخراج العينات.يمكن الاحتفاظ بعينة واحدة في 20 درجة مئوية للحفاظتجنب دورات التجمد والتذوب المتكررة.

2لا يمكن اكتشاف العينة التي تحتوي على NaN3، لأن NaN3 يمنع HRP نشطة.

ملاحظات مهمة

1يجب أن تخرج المجموعة من البيئة التبريدية وتتوازن لمدة 15-30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة، لوحات ELISA مغلفة إذا لم تستخدم بعد فتح،يجب تخزين اللوحة في كيس مغلق.

2. غسل العازل سوف التبلور الفصل، ويمكن تسخين الماء يساعد في الذوبان عند تخفيف. غسل لا يؤثر على النتيجة.

3. إضافة عينة مع عينة كل خطوة، وقراءة دقة لها في كثير من الأحيان، وتجنب الخطأ التجريبي. إضافة عينة في غضون 5 دقائق، إذا كان عدد العينة هو الكثير، ننصح باستخدام Voley.

4إذا كان محتوى مادة الاختبار أعلى من اللازم (معدل معدل الدفع في العينة أكبر من القيمة القياسية الأولى) ، يرجى تخفيف العينة (n-fold) ، يرجى تخفيفها وتضاعف على عامل التخفيف.(×n×5).

5غشاء لوحة الإغلاق يحد فقط من الاستخدام القابل للتخلص منه ، لتجنب التلوث المتبادل.

6.الجزء السفلي يتجنب الحفاظ على الضوء

7يرجى وفقا لتعليمات الاستخدام بدقة، يجب أن تأخذ تحديد نتائج الاختبار قارئ لوحة microtiter كمعيار.

8يجب أخذ عينات، غسل العازل وكل نوع من النفايات وفقا لعملية المواد المعدية.

9لا تخلط المفاعلات مع تلك من المجموعات الأخرى.