VCAM-1 RUO Elisa Kit جزيء الارتباط الخلوي للأوعية الدموية البشرية 1

وصف المنتج:

الغرض

تسمح هذه المجموعة بتحديد تركيزات VCAM-1 في مصل البشر، ومتطلبات ثقافة الخلايا والسوائل البيولوجية الأخرى

مبدأ الاختبار

مجموعة تحليل مستوى VCAM-1 البشري في العينة، استخدام نقية البشرية VCAM-1 مضاد الجسم لتغطية microtiter لوحات البئر، جعل الجسم المضاد في المرحلة الصلبة، ثم إضافة VCAM-1 إلى البئر،الأجسام المضادة المشتركة لـ VCAM-1 والتي تحمل علامة HRP، يصبح مضاد الجسم - مضاد الجسم - معقد إنزيم - مضاد الجسم، بعد غسل تماما، إضافة TMB محلول الركيزة، TMB الركيزة يصبح اللون الأزرق عند HRP إنزيم-متحفز،يتم إنهاء التفاعل بإضافة محلول حمض الكبريتيك ويتم قياس تغير اللون بشكل طيفي في طول موجة 450 نانومتريتم بعد ذلك تحديد تركيز VCAM-1 البشري في العينات عن طريق مقارنة OD العينات مع المنحنى القياسي.

المواد المقدمة مع مجموعة

المعلمات التقنية:

متطلبات العينات

• يجب استخراج العينات في أقرب وقت ممكن بعد جمع العينات وفقًا للأدبيات ذات الصلة ، ويجب إجراء التجربة في أقرب وقت ممكن بعد الاستخراج.يمكن الاحتفاظ بالعينات في -20 درجة مئوية للحفاظتجنب دورات التجمد والتذوب المتكررة.
• لا يمكن الكشف عن العينة التي تحتوي على NaN3 لأن NaN3 يمنع HRP نشط.

إجراءات التقييم

• خفيف وإضافة العينة:خفيف معيار الكثافة الأصلية كما يلي الجدول:

2إضافة العينة: وضع الآبار الفارغة بشكل منفصل (أبواب المقارنة الفارغة لا تضيف العينة والفاعل HRP-Conjugate ، غير أن كل عملية خطوة هي نفسها).إضافة 50μl من القياسية إلى Microelisa stripplateإضافة 40μl من خفيفة العينة إلى عينات الاختبار، ثم إضافة عينة الاختبار 10μl (الخفيفة النهائية للعينة هي 5 مرات) ، إضافة عينة إلى الآبار ، لا تلمس جدار البئر بقدر الإمكان، ومزج بعناية.

3الحضانة: بعد إغلاق الصفيحة مع غشاء الصفيحة المغلقة ، الحضانة لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية.

4تكوين السائل: 30 مرة ((أو 20 مرة) محلول غسل مخفف 30 مرة (أو 20 مرة) بالماء المقطر والاحتياطي.

5غسل: كشف غشاء لوحة الإغلاق، التخلص من السائل، الجفاف عن طريق التأرجح، إضافة عازل الغسيل إلى كل بئر، لا تزال لمدة 30s ثم تصريف، كرر 5 مرات، جفاف عن طريق الضغط.

6إضافة إنزيم: إضافة مرجع HRP-Conjugate 50μl إلى كل بئر، باستثناء البئر الفارغ.

7الحضانة: العملية مع 3.

8غسيل: العملية مع 5.

9اللون: إضافة محلول الكروموجين A 50ul و محلول الكروموجين B 50ul إلى كل بئر ، وتجنب الحفاظ على الضوء لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية

10. توقف التفاعل: أضف Stop Solution50μl إلى كل بئر، توقف التفاعل ((تغير اللون الأزرق إلى اللون الأصفر).

11. التقييم: خذ البيضاء كما الصفر ، قراءة امتصاص في 450nm بعد إضافة حل وقف وفي غضون 15min

الحساب:

خذ الكثافة القياسية على الأفقية، وقيمة OD للرأسية، ورسم المنحنى القياسي على ورقة الرسوم البيانية،معرفة الكثافة المقابلة وفقا لقيمة OD العينة عن طريق منحنى العينة، مضروبة بمضاعف التخفيف ، أو حساب معادلة الانحدار الخط مستقيم من المنحنى القياسي مع الكثافة القياسية وقيمة OD ،مع قيمة OD العينة في المعادلة ،حساب كثافة العينة، مضروبة في عامل التخفيف، والنتيجة هي الكثافة الفعلية للعينة.