EBV-VCA IgA Ab اختبار ELISA عدة إنزيم المقايسة المناعية عينة البلازما

رقم كتالوج مجموعة EBV-VCA IgA Ab ELISA: BE501A
المقايسة المناعية الإنزيمية للكشف عن الأجسام المضادة IgA لمستضد القفيصة الفيروسي (VCA) لفيروس إبشتاين بار (EBV).
 
1. مبدأ الفحص
تستخدم مجموعة EBV-VCA IgA Ab ELISA نظامًا للكشف حيث يتم طلاء آبار الصفيحة الدقيقة بمستضد مؤتلف يتوافق مع قطاع مستضد عالي EBV-VCA.عينات المصل أو البلازما ، تضاف الضوابط إلى الآبار.أثناء الحضانة ، فإن الأجسام المضادة IgA الخاصة بـ EBV-VCA الموجودة في العينة سوف ترتبط بمولد الضد المؤتلف المثبت على آبار الصفيحة الدقيقة.يتم غسل الآبار لإزالة المواد غير المقيدة ، وسوف يرتبط اتحاد بيروكسيداز IgA المضاد للإنسان بمركب الأجسام المضادة للمستضد ويتم إزالة اقترانات الإنزيم الزائدة غير المرتبطة مرة أخرى عن طريق الغسيل.تتم إضافة ركيزة الإنزيم ، tetramethylbenzidine (TMB) ، عند الحضانة ، وسيتم تحلل الركيزة بواسطة الإنزيم المرتبط ويتطور اللون الأزرق أو الأزرق والأخضر في الآبار التي تحتوي على أجسام مضادة لـ EBV-VCA IgA.يتم إيقاف تفاعل الإنزيم بإضافة حامض الكبريتيك.تتم قراءة شدة اللون المطوَّر قياسًا ضوئيًا عند 450 نانومتر (450 نانومتر / 630 نانومتر) وتتناسب مع كمية الأجسام المضادة الموجودة في العينة.
الكواشف
 
2. المواد المقدمة مع المجموعات:

 
3. إجراء الفحص

1. أحضر مجموعة ELISA (جميع الكواشف) والعينات إلى درجة حرارة الغرفة قبل الاستخدام (حوالي 30 دقيقة).
2. عازلة غسيل مركزة مخففة 1:19 مع ddH2O.على سبيل المثال ، يجب تخفيف 5 مل من محلول الغسيل المركز إلى حجم إجمالي 100 مل بالماء منزوع الأيونات أو الماء المقطر.
3. لكل اختبار ، قم بتعيين عنصر تحكم فارغ وكذلك في الخلفية ، واثنين من عناصر تحكم موجبة وثلاثة عناصر تحكم سلبية.الاستغناء عن 100 مل التحكم الإيجابي والسيطرة السلبية مكررة في الآبار الفردية.لا ينبغي إضافة أي من العينات ولا HRP-Conjugate في البئر الفارغ.
4. الاستغناء عن 100 مل من العينة المخففة في آبار الاختبار الفردية باستثناء الضوابط.
5. أضف 10 مل من كل عينة اختبار في آبار الاختبار ؛دوامة للخلط.
6. احتضان لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية
7. اغسل كل بئر 5 مرات عن طريق ملء كل بئر بمحلول غسيل مخفف ، ثم اقلب اللوحة بقوة لإخراج كل الماء وسد حافة الآبار على ورق ماص لبضع ثوان.
8. أضف 100 مل من الإنزيم المتقارن إلى كل بئر.امزجه برفق عن طريق تحريك لوحة ميكروتيتر على طاولة مسطحة لمدة دقيقة واحدة.لا تقم بإضافة Enzyme Conjugate إلى البئر الفارغ.
9. احتضان لمدة 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية
10. اغسل اللوحة 5 مرات كخطوة 7.
11. أضف قطرة واحدة (50 مل) من محلول الركيزة أ (ركيزة HRP) لكل بئر ، ثم أضف قطرة واحدة (50 مل) من محلول الركيزة B (TMB) لكل بئر.تخلط بلطف وتحتضن عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة..
12. أضف قطرة واحدة (50 مل) من محلول الإيقاف لكل بئر لإيقاف تفاعل اللون.اقرأ قيمة OD عند 450 نانومتر / 630 نانومتر مع قارئ لوحة الفلتر المزدوج.إنه خيار لقراءة قيمة OD عند 450 نانومتر مع قارئ لوحة المرشح الفردي.(باستخدام قيمة OD للبئر الفارغ لتصحيح كل قراءة OD من جميع الآبار)