مجموعة اختبار ELISA للجسم المضاد (IgE)

الاستخدام المقصود

  هذه المجموعة هي الكشف الكمي عن إجمالي الأجسام المضادة لـ IgE (IgE) في مصل البشر / البلازما في المختبر. يمكن لهذه النتيجة أن تساعد في تشخيص الحساسية من النوع الأول.قد يوصى أيضاً باختبار IgE الكلي للمرضى الذين يشتبه في وجود أمراض طفيلية..

مبدأ الاختبار

  تتوسط حساسية مرتفعة فورية (حساسية من النوع الأول) بواسطة IgE المحددة.زيادة مستوى IgE المحدد لدى المرضى يرافقه زيادة في مستوى IgE الإجماليفي هذه الحالة ، يمكن أن يرتفع الدرجة إلى 1000 مرة. بشكل عام ، يتم تعريف الوحدات الدولية لكل ملليتر (IU / mL) على أنها: 1 IU / mL يساوي 2.4 ng IgE. في المرضى الذين يعانون من التهاب الجلد الحساس الوراثي ،مستويات IgE يمكن أن تصل إلى 50وبالإضافة إلى ذلك ، فإن مستويات IgE مرتفعة في المرضى الذين يعانون من أمراض طفيلية. يجب أن تأخذ نتائج الاختبار أعلى من المعتاد في الاعتبار تأثير الأمراض المناعية الذاتية المؤكدة.

لا يوصى باستخدام المفاعل في الفحص البدني للأشخاص الأصحاء، فنتائج الاختبار إيجابية أو سلبية فقط في مقابل نتائج اختبار الأجسام المضادة IgE المقابلة إيجابية أو سلبية.عدم اليقين الارتباط مع المريض هو مريض وربما لا تكون كمؤشر الوحيد لتقييم المرضى، يجب أن تُجمع مع عرض المريض السريري و اختبارات مختبرية أخرى لتحليل المرض بشكل متكامل.

طريقة الكشف لهذه المجموعة هي الاختبار المناعي المرتبط بالأنزيم. في هذا المفاعل ، تم اعتماد مبدأ الاختبار المناعي الساندويتش المزدوج للجسم المضاد.الأجسام المضادة الموحدة التي تتعرف على مضادات IgE تم تغليفها مسبقًا في آبار الصفيحة، وعينات من مصل البشر / البلازما وجسم مضاد أحادي النسخ معلّم بالانزيمات في مسام اللوحة. بعد الحضانة والغسل ، تم إضافة محلول الركيزة.تم قراءة قيمة OD وحساب محتوياتها بواسطة قارئ لوحة صغيرة.

إجراءات الاختبار

1.يجب السماح لجميع المفاعلات بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة قبل الاستخدام.

2يجب تخفيف عازل الغسيل بمعدل تخفيف 1:40 بالماء المقطر قبل الاستخدام.

3يجب أن تكون العينة مطابقة لعدد لوحات الميكرو ، يجب أن يتم تزويد كل لوحة بعيود مرجعية (يتم تحديد عدد الآبار حسب المرجع والعينات التي سيتم اختبارها).

الملاحظة: استخدم رأس أنبوب التخلص منفصل لكل عينة، كل مرجع لتجنب التلوث المتقاطع.

4إضافة 100μL من مخفف العينة في البئر المقابلة، إضافة 20μL لكل مرجع S0، S1، S2، S3، S4، S5 وعينة على التوالي إلى البئر المقابلة.

5هز بهدوء حتى تخلط، واكب في درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع غشاء لوحة الختم

6. في نهاية الحضانة ، إزالة والتخلص من غطاء لوحة. أخرج ، إضافة الغسيل العازل إلى كل بئر لمدة 10 ثواني. كرر 5 مرات. بعد الدورة الغسيل النهائية ،قم بتحويل اللوحة إلى ورقة أو منشفة نظيفة، ونقر عليه لإزالة أي بقايا.

7إضافة 100 ميكرو لتر على التوالي. الحضانة في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع غشاء لوحة الختم الختم لوحة.

8غسل الطبق كخطوة 6

9إضافة الركيزة A (50μL) والركيزة B (50μL). هز بلطف لخلط. الحضانة في 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق مع غشاء لوحة الختم الختم لوحة.

10إضافة 50 ميكرو لتر من محلول التوقف إلى كل بئر. خلط بلطف عن طريق الهز، وقراءة امتصاص في غضون 10 دقائق بعد وقف التفاعل.ثم قراءة قيمة امتصاص في 450nm/ 630nm مع قارئ الصفائح الدقيقة.حساب التركيز وتقييم النتائج