الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد B (HBcAb)

ELISA Tهوكهو

للاستخدام التشخيصي في المختبر والاستخدام المهني فقط

اسم المنتج

مجموعة اختبار ELISA ضد HBc (المصل / البلازما)

الاستخدام المقصود

هذه مجموعة اختبار ELISA المضادة لـ HBc هي الكشف النوعي عن الأجسام المضادة لمضاد جوهر فيروس التهاب الكبد B (HBcAb) في المصل / البلازما البشرية.المفاعل مناسب للفحص السريري وتشخيص عدوى فيروس التهاب الكبد B في المصل البشري / البلازما.

مبدأ الاختبار

فيروس التهاب الكبد B (HBV) هو مظروففيروس الحمض النووي ذو الخيوط المزدوجة ينتمي إلى عائلة Hepadnaviridae ويعترف بأنه السبب الرئيسي لتهاب الكبد المنقول بالدم جنبا إلى جنب مع فيروس التهاب الكبد C (HCV)يسبب الإصابة بفيروس التهاب الكبد الوبائي مجموعة من المظاهر السريرية تتراوح من مرض خفيف غير واضح إلى التهاب الكبد الشديد ، أمراض الكبد المزمنة الشديدةوالتي يمكن أن تؤدي في بعض الحالات إلى تليف الكبد و سرطان الكبدإن تصنيف عدوى التهاب الكبد B يتطلب تحديد العديد من المؤشرات المصلية التي يتم التعبير عنها خلال ثلاث مراحل (الحضانة والحادة والشفاء) للعدوى.

المكون الرئيسي للفيروس هو مضاد الالتهاب الكبد B الأساسي (HBcAg).يتكون هذا المضاد الأساسي من بولي ببتيد واحد يبلغ طوله حوالي 17kD يتم تفريغه عند تفكيك جزيئات الأساسيوجد في المضاد ما لا يقل عن عامل تحديد مناعي واحد.

بعد فترة وجيزة من ظهور HBsAg ، تظهر الأجسام المضادة لـ HBcAg (الجسم المضاد الكلي لمضاد HBc و IgM) ولا تختفي أبدًا.يمكن الإصابة بالتهاب الكبد الوبائي B دون وجود مضاد لـ HBc يمكن اكتشافه من الناحية المناعيةويتم العثور على هذا عادة في المرضى الذين يعانون من قمع المناعة. يقدم فحص مضاد لـ HBc بيانات حول انتشار التهاب الكبد B في مختلف السكان. وذلك لأن مضاد لـ HBc هو علامة على التهاب الكبد الحاد.المزمن، أو إصابة بفيروس التهاب الكبد البشري. إن تحديد مضادات فيروس التهاب الكبد البشري أمر حيوي عند التشخيص في بيئة سريرية. جنبا إلى جنب مع اختبارات التهاب الكبد B الأخرى،مؤشر مضاد لـ HBc يسمح بالتشخيص الصحيح ومراقبة التقدم الصحيح للفيروسقد يكون مضاد HBc المؤشر الوحيد للعدوى بالتهاب الكبد B (بما في ذلك الاختبارات الأخرى للمرضى السلبيين لـ HBsAg).

يعتمد نظام اختبار HBcAb ELISA على مبدأ المرحلة الصلبة، الحضانة في مرحلة واحدة. عندما تكون مضادة HBc موجودة،يتنافس مع مضاد HBc أحادي النسل المرتبط بالبيروكسيداز الحشيشي (HRP-Conjugate) للحصول على كمية ثابتة من HBcAg المطهر المغطى مسبقًا في الصفيحةإذا لم يكن هناك مضاد لـ HBc ، فسيتم ربط مضاد HRP المرتبط مع HRP مع المضادات داخل الآبار. أثناء الغسل ، يتم إزالة أي HRP-Conjugate غير المرتبط.بعد إضافة محلولات الكروموجين A و B إلى الآبار وأثناء الحضانة، يظهر منتج ذو لون أزرق. بعد إيقاف التفاعل مع حمض الكبريتيك ، يتحول اللون الأزرق إلى اللون الأصفر. يشار إلى وجود أجسام مضادة لـ HBcAg في العينة باللون المنخفض ،أو لا يوجد أي لون على الإطلاق.

متطلبات العينة

1.جمع العينات:لا يتطلب أي تحضير خاص للمريض. يتم جمع العينة وفقًا للممارسة المعملية العادية. يمكن استخدام عينة مصل / بلازما طازجة مع هذا الاختبار.يجب السماح للدم الذي تم جمعه عن طريق غرس الوريد بالتخثر بشكل طبيعي وكامل يجب فصل المصل من الجلط في أقرب وقت ممكن لتجنب تخثر الدموية الحمراءيجب توفير الاهتمام لضمان أن عينات المصل / البلازما واضحة وغير ملوثة بالكائنات الحية الدقيقة.

2.هـيجب عدم استخدام العينات التي تعاني من الدهون الشديدة أو الصدفية أو التهاب الدم تستخدملأنها يمكن أن تعطي نتائج خاطئة في الاختبار.لا تُبطل الحرارة العيناتهذا يمكن أن يسبب تدهور التحليل المستهدف. يجب ألا تستخدم العينات ذات التلوث الميكروبي المرئي.

3يستهدف اختبار HBcAb ELISA اختبار عينات مصل/بلازما فردية فقط. لا تستخدم الاختبار لاختبار عينات الجثث أو اللعاب أو البول أو سوائل الجسم الأخرى أو الدم المجمّع (المختلط).

4- النقل والتخزين: تخزين العينات عند درجة حرارة 2-8 درجة مئوية. يجب تخزين العينات التي لا تحتاج إلى تحليل خلال 3 أيام في حالة تجميد (-20 درجة مئوية أو أقل). يجب تجنب دورات التجمد والذوبان المتعددة.للشحن، يجب أن تكون العينات معبأة وملصقة وفقًا للوائح المحلية والدولية الحالية لنقل العينات السريرية والعوامل الأثولوجية.

إجراء الاختبار

1يجب السماح لجميع المفاعلات بالوصول إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة قبل الاستخدام.

2يجب تخفيف عازل الغسيل بمعدل تخفيف 1:40 بالماء المقطر قبل الاستخدام.

3يجب أن تكون العينة مطابقة لعدد الصفائح الدقيقة ، ويجب أن يتم تزويد كل صفيحة بمراقبة سلبية 3 آبار ، ومراقبة إيجابية 2 آبار ومراقبة فارغة 1 آبار.(إذا تم الكشف عن مع الكشف عن طول موجة مزدوج، لا يسمح بتعيين بئر تحكم فارغ).

الملاحظة: استخدم طرفاً منفصلاً من أنبوبات التخلص لكل عينة، ومراقبة سلبية ومراقبة إيجابية لتجنب التلوث المتقاطع.

4إضافة عينة 50 ميكرو لتر في البئر المقابلة (عندما تستخدم هذه المجموعة للتشخيص السريري المساعد، يجب تخفيف العينة التي سيتم اختبارها بمحلول ملح عادي في 1:30 للاختبار.عندما تستخدم في التحقيقات الوبائية، يمكن اكتشاف العينة الأصلية ) ، أضف 50μL من التحكم السلبي والتحكم الإيجابي إلى آبار التحكم السلبي وأبراج التحكم الإيجابي.على التوالي إضافة إنزيم كونجوجات 50μL (لا تضيف في البئر الفارغ).

5. هز لمدة 30 ثانية باستخدام مذبذب (هذه الخطوة مهمة جداً) ، قم بتخزينها عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة مع غشاء اللوحة الختامية التي تغلق اللوحة.

6. في نهاية الحضانة ، إزالة والتخلص من غطاء لوحة. أخرج ، إضافة الغسيل العازل إلى كل بئر لمدة 20 ثانية. كرر 5 مرات. بعد الدورة الغسيل النهائية ،قم بتحويل اللوحة إلى ورقة أو منشفة نظيفة، ونقر عليه لإزالة أي بقايا.

7إضافة الركيزة A (50μL) والركيزة B (50μL) (لا تضيف في البئر الفارغ). خلط بلطف عن طريق الهز. الحضانة في 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة مع غشاء لوحة الختم الختم لوحة.

8إضافة 50μL من محلول التوقف إلى كل بئر (لا تضيف في البئر الفارغ). خلط بلطف عن طريق الهز ، وقراءة امتصاص في غضون 10 دقائق بعد وقف التفاعل.معايرة قارئ اللوحة مع الفارغ جيدا وقراءة امتصاص في 450nm.إذا تم استخدام أداة تصفية مزدوجة ، حدد طول الموجة المرجعي عند 630nm. لا يسمح بتعيين أي آبار فارغة إذا تم استخدام طول الموجة المزدوج للكشف. حساب قيمة قطع وتقييم النتائج.